### 下一代全基因组人源化小鼠构建技术

尊龙凯时在传统胚胎干细胞（ES）打靶技术的基础上，推出了升级版的TurboKnockout®基因编辑技术。该技术利用优化的纯合ES克隆打靶体系，能够高效筛选进行基因敲除、敲入及点突变的纯合ES细胞。通过结合囊胚前注射与四倍体补偿技术进行显微注射，确保产生的Founder小鼠达到100%嵌合状态，所有组织细胞均完全由外源ES细胞分化而来，从根本上解决了传统技术中嵌合体比例不稳定的问题。

这一基因编辑技术的周期缩短至3个月，可大批量获得基因一致的纯合子小鼠。经过一系列实验验证，TurboKnockout®技术在确保100%嵌合率的同时，也展现出卓越的稳定性。其流程包括：载体构建→ES打靶→PCR/FACS验证→阳性胚胎制作→“100%”嵌合F0胚胎及小鼠生产→嵌合率验证。

首先，我们构建了Rosa26安全位点过表达载体CAGLuciferaseEGFP质粒，并在C57BL/6NWTES细胞上获得PCR正确的阳性克隆。随后，通过流式细胞仪验证EGFP的正确表达。

接下来，我们将获得的阳性ES克隆进行显微注射，产出阳性Founder小鼠，再通过常规传代获得纯合F2代雄鼠。F2雄鼠与C57BL/6NWT雌鼠交配生成可用于TurboKnockout®技术显微注射的阳性受体胚胎。通过显微注射C57BL/6NWT的ES细胞和未注射的空扎受体胚胎，分别获得125d胚胎及4周龄的Founder小鼠，并验证其Luciferase与EGFP的表达情况。

实验结果显示，125d的空扎胚胎与注射C57BL/6NWTES细胞的胚胎在EGFP表达上存在显著差异。在这两种胚胎经过单细胞解离后，流式细胞仪检测结果表明，空扎胚胎相对注射C57BL/6NWTES细胞的胚胎EGFP均有表达，同时未检测到EGFP阳性细胞的泄露表达。

将空扎胚胎和注射了WTES细胞的胚胎分别移植到ICR代孕鼠体内，出生的Founder小鼠在4周龄时进行活体成像。结果表明，注射C57BL/6NWTES细胞的胚胎未见Luciferase荧光泄露，而空扎的胚胎发育的小鼠则表现出显著的Luciferase强荧光，差异呈显著统计学意义。

为了进一步确认注射了C57BL/6NWTES细胞的胚胎是否具有CAGLuciferaseEGFP细胞嵌合性，对注射了WTES细胞的4周龄小鼠及125d胚胎的各个组织进行PCR验证，并添加空扎胚胎作为阳性对照。结果显示，注射C57BL/6NWTES细胞的F0小鼠各组织和胚胎均未检测到MT条带。

总结而言，TurboKnockout®技术生成的Founder小鼠为100%嵌合状态，所有组织细胞均由外源ES细胞分化而来，显示出其在基因编辑上的显著优势。

### TurboKnockout®基因编辑技术优势

1. **编辑类型多样化**：能够进行多种项目类型的基因修饰，如基因敲除、敲入、点突变或人源化等；

2. **QC体系多样化**：除了常规PCR鉴定，技术还支持多种方法质检（QC）ES克隆打靶的准确性，包括染色体核型鉴定、Southern Blot鉴定、qPCR鉴定及FACS鉴定等；

3. **F0基因型稳定**：结合法律保护的TurboKnock显微注射技术和四倍体补偿技术，确保所有交付的F0代小鼠基因型一致，基因修饰准确、效果稳健；

4. **品系选择灵活**：尊龙凯时提供C57BL/6NCya、C57BL/6JCya、BALB/cAnCya、129S2/SvPasCya等多种品系选择。

### TurboKnockout®基因编辑小鼠模型

1. **HUGO-GT®全基因组人源化模型**：在尊龙凯时自主研发的TurboKnockout®技术基础上，成功构建涉及更多干预靶点的全基因组人源化小鼠。这些HUGO-GT®小鼠整合了更高效的大片段载体融合技术，能够作为高效的模板进行有针对性的突变定制，深度贴合真实生物机制的药物临床前研究。同时，基于HUGO-GT®小鼠的基础上，尊龙凯时还提供眼科、神经、肿瘤免疫等领域的CRO服务，推进遗传性疾病研究及基因治疗药物的开发。

2. **HUGO-Ab®全人源抗体小鼠**：基于全人抗体药物研发的需求，尊龙凯时运用创新技术和TurboKnockout® ES打靶技术，构建了下一代HUGO-Ab®全人源抗体小鼠，携带完整的人类免疫球蛋白基因，能够在体内产生高亲和力、低免疫原性的全人源抗体。在抗体发现过程中，系列产品如HUGO-Mab™、HUGO-Light™和HUGO-Nano™展示了丰富的抗体序列多样性，已经得到多家跨国药企和学术机构的广泛认可，成为治疗性抗体新药开发的强大助力。

此外，尊龙凯时还提供多种基因编辑定制服务，包括完全性基因敲除小鼠、条件性基因敲除小鼠、基因敲入小鼠以及利用KO-First技术灵活构建小鼠，以满足不同研究需求，为药物筛选、信号通路分析和遗传机制解析提供高效工具。